Xây dựng kỹ thuật Real-time COLD-PCR có độ nhạy cao để phát hiện đột biến RTA194T kháng thuốc Tenofovir điều trị viêm gan B
Nội dung chính của bài viết
Tóm tắt
Đột biến rtA194T trên vùng gen mã hóa cho enzym RTase của HBV được chứng minh có liên quan đến tình trạng kháng thuốc Tenofovir disoproxil fumarate (TDF) trong điều trị viêm gan B mạn tính. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã xây dựng thành công kỹ thuật real-time COLD-PCR sử dụng TaqMan LNA probe có với tỷ lệ 0,1% đột biến/thể dại (mt/wt) để phát hiện sớm đột biến rtA194T ở bệnh nhân viêm gan B điều trị TDF. Kỹ thuật sau đó đã được thử nghiệm để phát hiện đột biến rtA194T trên 75 mẫu huyết thanh bệnh nhân viêm gan B mạn tính đã và đang điều trị với TDF, và kết quả là chúng tôi không ghi nhận trường hợp bệnh nhân nào mang đột biến rtA194T. Kết luận lại, kỹ thuật real-time COLD-PCR sử dụng TaqMan LNA probe có độ nhạy cao (0,1% mt/wt) với thời gian thực hiện nhanh trong vòng 3 giờ có tiềm năng ứng dụng trong việc sàng lọc sớm đột biến rtA194T liên quan tới kháng thuốc TDF để tư vấn và theo dõi hiệu quả việc điều trị thuốc TDF cho bệnh nhân viêm gan B trong tương lai.
Chi tiết bài viết
Từ khóa
HBV, rtA194T, real time COLD-PCR, TaqMan LNA probe, Tenofovir disoproxil fumarate (TDF)
Tài liệu tham khảo
2. Sharma V, Sharma R, Gaurav G. First Report of Primary Tenofovir Resistance in a Hepatitis B Viral Hepatitis Patient from India without Human Immunodeficiency Virus Co-infection. J Liver Res Disord Ther. 2016;2(5):37. doi:10.15406/jlrdt.2016.02.00037
3. Cho WH, Lee HJ, Bang KB, Kim SB, Song IH. Development of tenofovir disoproxil fumarate resistance after complete viral suppression in a patient with treatment-naïve chronic hepatitis B: A case report and review of the literature. World J Gastroenterol. 2018;24(17):1919-1924. doi:10.3748/wjg.v24.i17.1919
4. Park ES, Lee AR, Kim DH, et al. Identification of a quadruple mutation that confers tenofovir resistance in chronic hepatitis B patients. J Hepatol. 2019;70(6):1093-1102. doi:10.1016/j.jhep.2019.02.006
5. Rawal R, Konreddy A, Chu C. Mechanism of Adefovir, Tenofovir and Entecavir Resistance: Molecular Modeling Studies of How A Novel Anti-HBV Agent (FMCA) Can Overcome the Drug Resistance. Curr Med Chem. 2015;22(34):3922-3932. doi:10.2174/0929867322666150904144802
6. Liu C, Lin J, Chen H, et al. Detection of Hepatitis B Virus Genotypic Resistance Mutations by Coamplification at Lower Denaturation Temperature-PCR Coupled with Sanger Sequencing. J Clin Microbiol. 2014;52(8):2933-2939. doi:10.1128/JCM.01127-14
7. Wong DKH, Tsoi O, Huang FY, et al. Application of Coamplification at Lower Denaturation Temperature-PCR Sequencing for Early Detection of Antiviral Drug Resistance Mutations of Hepatitis B Virus. McAdam AJ, ed. J Clin Microbiol. 2014;52(9):3209-3215. doi:10.1128/JCM.00343-14
8. Phung TTB, Chu SV, Vu ST, et al. COLD-PCR Method for Early Detection of Antiviral Drug-Resistance Mutations in Treatment-Naive Children with Chronic Hepatitis B. Diagnostics. 2020;10(7):491. doi:10.3390/diagnostics10070491
9. Sun Z, Zhou L, Zeng H, Chen Z, Zhu H. Multiplex locked nucleic acid probes for analysis of hepatitis B virus mutants using real-time PCR. Genomics. 2007;89(1):151-159. doi:10.1016/j.ygeno.2006.07.011
10. Truong H, Nguyen VA, Nguyen HL, Pham VA, Phan TN. Sensitive quantification of mitochondrial mutation using new Taqman probes. Cent Eur J Med. 2014;9(6):839-848. doi:10.2478/s11536-013-0325-8
11. Motahar M, Arabzadeh SA, Mollaei H, Iranmanesh Z, Nikpour N, Soleimani F. Evaluation of HBV resistance to tenofovir in patients with chronic hepatitis B using ZNA probe assay in Kerman, southeast of Iran. Asian Pacific J Trop Dis. 2016;6(7):513-516. doi:10.1016/S2222-1808(16)61079-4
12. Alacam S, Karabulut N, Yolcu A, et al. Evaluation of drug resistance mutations in patients with chronic hepatitis B. Folia Microbiol. 2019;64(2):237-243. doi:10.1007/s12223-018-0650-z