9. Tối ưu quy trình đánh giá biểu hiện gen TNFα trên tế bào nuôi diệt tự nhiên ở bệnh nhân ung thư phổi bằng phương pháp real-time PCR
Nội dung chính của bài viết
Tóm tắt
Nghiên cứu nhằm xây dựng và tối ưu quy trình đánh giá biểu hiện gen TNFα trên tế bào diệt tự nhiên (NK) được nuôi cấy từ máu ngoại vi của bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ (NSCLC). Mẫu nghiên cứu bao gồm 10 bệnh nhân được chẩn đoán NSCLC, tế bào NK được phân lập và nuôi cấy nhằm kích hoạt và tăng sinh số lượng tế bào. Quy trình được tối ưu hóa các thông số phản ứng PCR và Real-time PCR, bao gồm nhiệt độ gắn mồi, nồng độ mồi, sử dụng β-actin làm gen nội chuẩn. Phân tích biểu hiện TNFα được thực hiện bằng phương pháp 2-∆∆Ct. Kết quả cho thấy, sau 21 ngày, mức biểu hiện TNFα trung bình tăng 2,22 ± 1,08 lần so với thời điểm ban đầu, trong khi biểu hiện của gen β-actin duy trì ổn định giữa các thời điểm khảo sát, đảm bảo độ tin cậy cho phân tích định lượng. Quy trình tối ưu hóa cho phép đánh giá hiệu quả biểu hiện TNFα trên tế bào NK, phản ánh hoạt tính miễn dịch của tế bào. Nghiên cứu góp phần khẳng định tiềm năng ứng dụng tế bào NK hoạt hóa ex vivo trong liệu pháp miễn dịch ung thư tại Việt Nam.
Chi tiết bài viết
Từ khóa
TNFα, tế bào NK, Real-time PCR, ung thư phổi, biểu hiện gen
Tài liệu tham khảo
2. Gettinger S, Horn L, Jackman D, et al. Five-Year Follow-Up of Nivolumab in Previously Treated Advanced Non-Small-Cell Lung Cancer: Results From the CA209-003 Study. J Clin Oncol. 2018; 36(17): 1675-1684. doi:10.1200/JCO.2017.77.0412.
3. Barry KC, Hsu J, Broz ML, et al. A natural killer–dendritic cell axis defines checkpoint therapy–responsive tumor microenvironments. Nat Med. 2018; 24(8): 1178-1191. doi:10.1038/s41591-018-0085-8.
4. Wang R, Jaw JJ, Stutzman NC, Zou Z, Sun PD. Natural killer cell-produced IFN-γ and TNF-α induce target cell cytolysis through up-regulation of ICAM-1. J Leukoc Biol. 2012; 91(2): 299-309. doi:10.1189/jlb.0611308.
5. Chiossone L, Dumas PY, Vienne M, Vivier E. Natural killer cells and other innate lymphoid cells in cancer. Nat Rev Immunol. 2018; 18(11): 671-688. doi:10.1038/s41577-018-0061-z.
6. Ali Z, Zafar U, Khaliq S, Lone KP. Elevated Tumor Necrosis Factor (TNF)-α mRNA Expression Correlates with Nuclear Factor Kappa B Expression in Peripheral Blood Mononuclear Cells in Preeclampsia. J Coll Physicians Surg Pak. 2020; 30(2): 158-162. doi:10.29271/jcpsp.2020.02.158.
7. Andreev K, Denis Iulian Trufa I, Siegemund R, et al. Impaired T-bet-pSTAT1α and perforin- mediated immune responses in the tumoral region of lung adenocarcinoma. Br J Cancer. 2015; 113(6): 902-913. doi:10.1038/bjc.2015.255.
8. Kubista M, Andrade JM, Bengtsson M, et al. The real-time polymerase chain reaction. Mol Aspects Med. 2006; 27(2-3): 95-125. doi:10.1016/j.mam.2005.12.007.
9. Sutlu T, Stellan B, Gilljam M, et al. Clinical-grade, large-scale, feeder-free expansion of highly active human natural killer cells for adoptive immunotherapy using an automated bioreactor. Cytotherapy. 2010; 12(8): 1044-1055. doi:10.3109/14653249.2010.504770.
10. Balkwill F. Tumour necrosis factor and cancer. Nat Rev Cancer. 2009; 9(5): 361-371. doi:10.1038/nrc2628.
11. Vivier E, Tomasello E, Baratin M, Walzer T, Ugolini S. Functions of natural killer cells. Nat Immunol. 2008; 9(5): 503-510. doi:10.1038/ni1582.
12. Ljunggren HG, Malmberg KJ. Prospects for the use of NK cells in immunotherapy of human cancer. Nat Rev Immunol. 2007; 7(5): 329-339. doi:10.1038/nri2073.
13. Shimasaki N, Jain A, Campana D. NK cells for cancer immunotherapy. Nat Rev Drug Discov. 2020; 19(3): 200-218. doi:10.1038/s41573-019-0052-1.
14. Granzin M, Stojanovic A, Miller M, Childs R, Huppert V, Cerwenka A. Highly efficient IL- 21 and feeder cell-driven ex vivo expansion of human NK cells with therapeutic activity in a xenograft mouse model of melanoma. Oncoimmunology. 2016; 5(9): e1219007. doi:10.1080/2162402X.2016.1219007.